人微 RNA-181a-5p 对胃癌细胞增殖转移能力的影响

摘要：目的：探讨人 miRNA-181a-5p 对胃癌细胞转移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量（qRT）-PCR 检测 miRNA-181a-5p 在胃癌细胞系 GC9811及其腹膜高转移细胞系 GC9811-P 中的表达。将 miRNA-181a-5p 的内源性人工合成模拟物 mimic 和无关阴性对照转染胃癌细胞系 GC9811分别作为上调组和上调对照组；将 miRNA-181a-5p 的 miRNA 抑制子和无关阴性对照转染胃癌腹膜高转移细胞系 GC9811-P 分别作为下调组和下调对照组。采用 MTT 比色试验、平板克隆形成试验、Transwell 体外迁移实验、划痕体外迁移实验和细胞凋亡实验以验证上调和下调 miRNA-181a-5p 后胃癌细胞的增殖、转移和凋亡能力的变化；采用蛋白质印迹法验证上调及下调 miRNA-181a-5p、基质金属蛋白酶（MMP）14蛋白质水平的表达变化。两样本均数之间的比较采用独立样本 t 检验，率的比较采用卡方检验。结果 qRT-PCR 结果显示，miRNA-181a-5p 在 GC9811中的相对表达量为（1.00000±0.02126），在 GC9811-P 中为（3.17561±0.10676），差异有统计学意义（t ＝34.620，P ＜0.01）。MTT比色法显示，上调组细胞增殖速率高于上调对照组，而下调组低于下调对照组。平板克隆实验显示上调组的克隆形成数和克隆形成率分别为234.00±10.12和46.8%，上调对照组为93.00±9.61和18.6%，差异均有统计学意义（t＝17.500，χ2＝12.27，P 均＜0.01）；下调组为51.00±7.96和10.2%，下调对照组为99.00±8.05和19.8%，差异亦均有统计学意义（t＝7.344，χ2＝9.51，P 均＜0.01）；Transwell 迁移实验结果显示，上调组迁移出微孔膜的细胞数为（164.00±19.31）个，高于上调对照组[（87.00±23.04）个，t＝4.436，P ＜0.05]；下调组为（157.00±11.50）个，低于下调对照组[（234.00±12.12）个，t＝7.982， P ＜0.05]。划痕实验显示，上调组的迁移距离比为2.09±0.18，上调对照组为1.27±0.23；下调组为1.15±0.15，下调对照组为1.67±0.12，上调组和下调组分别与其对照组比较，差异均有统计学意义（t＝4.863、4.689，P 均＜0.01）。凋亡试验结果显示上调组的凋亡率为（6.10±1.02）%，上调对照组为（9.10±2.13）%，下调组为（12.70±1.23）%，下调对照组为（8.70±2.54）%，上调组和下调组分别与其对照组比较差异均无统计学意义（P 均*0.05）。蛋白质印迹法结果显示上调组的灰度值为561.881±35.740，高于上调对照组的275.784±23.520；下调组为579.565±37.950，低于下调对照组的1312.760±51.270，差异均有统计学意义（t ＝11.580、19.910，P 均＜0.01）。结论 miRNA-181a-5p 在胃癌腹膜高转移细胞系 GC9811-P 中高表达；它可促进胃癌细胞 GC9811、GC9811-P 增殖与迁移的能力，有抑制凋亡的趋势。