自噬在大鼠急性坏死性胰腺炎时的变化及其意义

摘要：目的 探讨自噬在实验性急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠发病中的变化及其意义.方法 按随机数字法将18只SD大鼠随机分为对照组、ANP组、ANP+雷帕霉素组.采用腹腔注射20％ L-精氨酸的方法制作大鼠ANP模型,造模后9h处死.ANP+雷帕霉素组于造模前30 min按大鼠体质量1.2 mg/kg腹腔注射雷帕霉素.对照组予腹腔注射等量0.9％ NaCl溶液.ELISA方法检测各组大鼠血清胰蛋白酶原活化肽(TAP)、IL-1、IL-6、TNFα水平,进行胰腺组织病理评分,电子显微镜下观察大鼠胰腺腺泡细胞自噬相关结构,实时定量-PCR、Western蛋白印迹法及免疫组织化学检测大鼠胰腺组织自噬标志物微管相关蛋白轻链3(LC3)-Ⅱ及Beclin-1 mRNA和蛋白的表达.组间均数比较采用单因素方差分析.结果 成功建立大鼠ANP模型,胰腺病理评分显示ANP+雷帕霉素组腺泡细胞坏死评分为2.19±1.38,高于ANP组(0.97±0.68),差异有统计学意义(F=33.75,P＜0.05).Western蛋白印迹法显示ANP组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达(分别为35.25±2.68和49.40±5.28)明显高于对照组(分别为1.54±0.16和0.78±0.06);而ANP+雷帕霉素组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达量(分别为123.53±3.21和76.41±3.80)比ANP组更高,差异均有统计学意义(F=2 045.54、326.87,P均＜0.01).免疫组织化学法显示ANP+雷帕霉素组LC3-Ⅱ及Beclin-1蛋白表达量(分别为7 570.63±4 357.67和3 418.09±2 035.78)明显高于ANP组(分别为1 926.53±1 414.44和536.11±403.10),差异均有统计学意义(F=39.83、41.58,P均＜0.01).Beelin-1 mRNA在ANP组的表达(107.12±29.10)较对照组(7.01±3.39)明显升高,差异有统计学意义(F=3.61,P＜0.05),但在ANP+雷帕霉素组的表达(97.63±65.38)与ANP组比较差异无统计学意义(P＞0.05).LC3-Ⅱ mRNA在ANP组的表达(1.76±1.59)与对照组(1.51±0.95)相比差异无统计学意义(P＞0.05),但在ANP+雷帕霉素组的表达(4.37±1.67)明显高于ANP组,差异有统计学意义(F=16.10,P＜0.05).电子显微镜显示ANP组自噬相关结构较对照组增加,ANP+雷帕霉素组则更多.ANP+雷帕霉素组血清TAP、IL-1、IL-6分别为(36.47±1.71) pmol/L、(122.88±26.67) pmol/L、(107.39±13.95) pg/mL,均明显高于ANP组(25.63±6.05) pg/mL、(98.06±9.29) pg/mL、(86.16±7.20) pg/mL,差异均有统计学意义(F=116.71、50.45、79.67,P均＜0.01);ANP+雷帕霉素组TNFα(140.80±60.82) pg/mL与ANP组(105.23±6.95) pg/mL相比,差异无统计学意义(F=14.76,P＞0.05).结论 ANP大鼠自噬增加,促进自噬可显著激活胰蛋白酶原,同时加重胰腺损伤和炎性反应,自噬可能通过激活胰蛋白酶原参与急性胰腺炎的发生.