期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办，上海市医学会承办。本刊是消化专业学术期刊，属中华医学会系列杂志之一。以广大消化科医师为主要读者对象，兼顾腹部外科、消化内镜、放射影像、临床检验等相关专业，及时报道消化科领域领先的科研成果和临床诊疗经验，以及对消化科临床有指导作用、且与消化科临床密切结合的基础理论研究，对从事消化科专业的临床医师有指导作用。
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首页>中华消化杂志
- 杂志名称：中华消化杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0254-1432
- 国内刊号：31-1367/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
丝裂原活化蛋白激酶特异性小干扰RNA表达载体对结肠癌细胞周期和DNA甲基化的影响
王霞；陈萦晅；房静远；陆嵘；孙丹凤；朱红音；李恩灵；沈冠凤
关键词：结肠肿瘤, DNA甲基化, RNA, 小分子干扰, 丝裂原激活蛋白激酶类, 基因表达, 遗传载体
摘要：目的 构建丝裂原活化蛋白激酶(MEK)基因的小干扰RNA(siRNA)表达载体,观察其静默效应及对结肠癌细胞SW1116生长周期和DNA甲基化的影响.方法 选择MEK不同靶点寡核苷酸片段,克隆到pGCsilencer真核表达载体中.脂质体转染SW1116细胞,荧光显微镜评估转染效率,G418筛选稳定表达siRNA的细胞.Western印迹法检测siRNA对MEK蛋白表达的静默效果.应用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法检测细胞生长活力,流式细胞术分析细胞周期,甲基化特异性PCR和DNA测序检测p16INK4A基因启动子甲基化状态.结果 构建2个靶点的MEK重组质粒,分别转染和联合转染SW1116细胞,转染效率约为72.1%,G418筛选培养2周得到稳定表达MEK siRNA的细胞,MEK蛋白抑制率分别为74.2%和69.1%和90.2%,下游分子ERK蛋白磷酸化水平随之降低;细胞增殖活力下降2～4倍和细胞周期阻滞于G1期,细胞周期负调控因子p16INK4A启动子区呈低甲基化状态.结论 MEK特异性siRNA表达载体对结肠癌细胞MEK蛋白表达有一定的静默效果,多靶点联合效果更好,阻滞细胞周期于G1期,促进p16INK4A基因去甲基化.
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