期刊简介
中国科学技术协会主管，中华医学会主办，上海市医学会承办。本刊是消化专业学术期刊，属中华医学会系列杂志之一。以广大消化科医师为主要读者对象，兼顾腹部外科、消化内镜、放射影像、临床检验等相关专业，及时报道消化科领域领先的科研成果和临床诊疗经验，以及对消化科临床有指导作用、且与消化科临床密切结合的基础理论研究，对从事消化科专业的临床医师有指导作用。
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- 杂志名称：中华消化杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中华医学会
- 国际刊号：0254-1432
- 国内刊号：31-1367/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：期刊收录：CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 国家图书馆馆藏, 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 万方收录(中), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊)
反义金属蛋白酶抑制因子-1对肝星形细胞的影响
刘文滨；王吉耀；杨长青；王逸青；蒋炜；贺伯明；郭津生
关键词：肝星形细胞, TIMP-1, Ⅰ型胶原, Ⅲ型胶原
摘要：目的探讨体外构建的反义金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)表达质粒在大鼠肝星形细胞(HSC)中的表达情况及对HSC活化后Ⅰ、Ⅲ型胶原量的影响.方法双酶灌注和梯度离心法分离正常大鼠HSC,培养7～10 d后活化为肌成纤维样母细胞表型.应用巢式RT-PCR和基因重组技术构建能在真核细胞中表达的反义TIMP-1质粒并测序鉴定.应用脂质体介导重组质粒和pcDNA3空质粒转染HSC,经含400 μg/ml G418的DMEM培养液筛选3～4周,另设立空白对照组.Northern blot和Western blot检测筛选后的HSC中TIMP-1表达情况;用FITC标记的Ⅰ型胶原为底物测定培养上清液内间质胶原酶活性;应用Western blot方法对HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原进行半定量分析.结果外源重组质粒能较大程度地抑制活化HSC中TIMP-1的表达,而pcDNA3空质粒和空白对照组则无类似结果.TIMP-1/GAPDH比值分别为0.67,2.41和2.97(mRNA水平,P＜0.05).TIMP-1/β-actin比值分别为0.31,0 98和1.32(蛋白质水平,P＜0.05).外源重组质粒转染显著提高了间质胶原酶活性,酶活性分别为0.3049,0.1411和0.1196(P＜0.05).HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原量明显减少.Ⅰ型胶原/β-actin比值分别为0.63,1.78和1.92(P＜0.05).Ⅲ型胶原/β-actin比值分别为0.59,1.81和1.98(P＜0.05).结论反义TIMP-1重组质粒可在HSC中获得稳定表达,并可大幅提高HSC培养液中间质胶原酶的活性,这就有可能提高对Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解能力,减少HSC中Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量,从而减少了以Ⅰ、Ⅲ型胶原为主的细胞外基质(ECM)过度沉积,为肝纤维化的逆转提供一个新的思路和方法.
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